熒光蛋白觀察用、油浸物鏡適用封片劑

熒光蛋白觀察用、油浸物鏡適用封片劑

Super Clear Mount封片劑

Super Clear Mount（RI:1.52）是將折射率（RI）調(diào)整到與浸油（RI:1.52）以及蓋玻片（RI:1.52）折射率wan全一致的產(chǎn)品。與傳統(tǒng)封片劑相比，Super Clear Mount提高了深層部位的分辨率，可用于更高分辨率的分析。另外，用油鏡觀察時，即使在深部也可以維持穩(wěn)定的亮度與分辨率（尤其是z分辨率），也可用于超分辨率的應(yīng)用。

數(shù)據(jù)來源：國立研究開發(fā)法人理化學(xué)研究所 柯孟岑老師、今井猛老師（現(xiàn)九州大學(xué)醫(yī)學(xué)研究院）

◆原理/性能表

圖1. Super Clear Mount原理

*Super Clear Mount雖為非硬化性，但與空氣接觸部分會硬化。因此，可以通過滴入過量的Super Clear Mount，用多余部分硬化蓋玻片、樣本和載玻片。

**與其他市售品比較，+++：好。

◆特點（深層部位的高分辨率、高明亮度）

圖2. 使用Super Clear Mount的深部高分辨率、高明亮度數(shù)據(jù)

（A）使用共聚焦顯微鏡（pinhole size，1 AU）與油浸物鏡（100 ×：NA 1.40；WD 0.13 mm）進行熒光微球(diameter, 100 nm)PSF分析。

（B）lateral 以及 axial　FWHM（分辨率）數(shù)據(jù)

（A）深層部位可維持高分辨率。

（C）使用羅丹明色素的共聚焦axial scans數(shù)據(jù)

（A）深層部位可維持高分辨率。

◆防止熒光蛋白褪色的效果

在廣泛的頻譜范圍內(nèi)發(fā)揮保持信號與防褪色效果

圖3. 使用Super Clear Mount的熒光蛋白防褪色效果數(shù)據(jù)

（A）熒光蛋白EGFP光褪色曲線圖

（A）HEK293細胞中的熒光蛋白表達后，分別使用Super Clear Mount、PBS、其他公司商品（熒光蛋白適用）封片。

（A）持續(xù)使用水銀燈照射并檢測熒光亮度變化。物鏡為20× dry（NA 0.4）。將照射開始時的熒光亮度設(shè)為1。

（B）各熒光蛋白熒光亮度的穩(wěn)定性。

◆使用超分辨率顯微鏡的應(yīng)用實例

使用超分辨率顯微鏡，實現(xiàn)深部超分辨率成像

圖4. 使用Super Clear Mount，并用超分辨率顯微鏡觀察

傳統(tǒng)的封片劑會使畫面失真，但使用Super Clear Mount能在深部獲得高分辨率圖像。

（A）使用超分辨率顯微鏡觀察細胞膜上的絲狀偽足延伸在HEK293T細胞的細胞膜上表達EGFP后，使用核染料、線粒體染料進行觀察通過超分辨顯微鏡獲取細胞膜上的絲狀偽足延伸。

（B）使用超分辨率顯微鏡觀察果蠅大腦

（A）果蠅大腦延髓神經(jīng)節(jié)的神經(jīng)細胞：使用熒光蛋白（GFP）標(biāo)記Mi1，使用超分辨率觀察（深度約為100 μm）。

（A）實現(xiàn)深層部分超分辨率成像。